RecA介导的特异性DNA片段捕获

• 作者: 于文强 张如奎 李岩 肖敏 肖瑶
• 来源期刊: 复旦学报：自然科学版
• 学科: 生物学
• 关键词: RecA DNA片段捕获 同源重组 ATP-γ-S 三链复合体
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 276-282,289,F0002
• 分类号: Q781
• 语种: 中文

摘要

外显子捕获联合高通量测序技术在检测新的致病基因,特别是罕见的基因变异时,表现出很高的检测效率.但在具体使用过程中,探针易出现非特异性杂交,设计探针时需考虑Tm值均一性、所需初始样品量较大等问题.RecA是原核生物同源重组的中心分子,参与DNA损伤的重组修复.通过在体外模拟RecA蛋白在原核生物体内重组寻找同源序列的途径,用以捕获目标DNA分子,以期提高外显子捕获过程中的探针杂交效率和特异性.根据RecA在体内同源重组中的作用模式,先将基因组染色质片段化,再纯化DNA,设计生物素标记的特异性探针,在RecA蛋白的介导下以捕获基因组中的目的同源片段.结果显示：设计的和目标片段互补的探针高效而特异地捕获了目标DNA片段,ATP和水能够破坏RecA介导形成的三链复合体的稳定性,可以作为很好的杂交后洗脱试剂,而且水直接作为洗脱试剂可以提高洗脱目的 DNA片段的效率和纯度.