黄喉拟水龟转铁蛋白重组表达及抗菌活性分析

• 作者: 史燕 朱新平 赵密 赵建 高明英
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黄喉拟水龟 转铁蛋白 重组表达 抗菌性
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 页码范围: 892-897
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 5180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1035.2012.00892

摘要

转铁蛋白具有多种生物学功能,不仅参与铁的转运,而且具有抗菌、免疫调节等功能.对黄喉拟水龟转铁蛋白(Mauremys mutica transferrin,MaTf)原核表达、重组蛋白纯化、抗菌活性检测及MaTf在蛋白水平的表达特征进行了分析研究.通过用RT-PCR技术扩增MaTf的编码序列,克隆至载体pET-32 a(+)；转化BL21(DE3),构建了其原核表达载体;优化表达条件(30℃,4h,0.8 mmol/L IPTG),使MaTf融合蛋白在BL21中高效表达；采用His Bind柱亲和层析与浓缩的方法纯化目的蛋白,Western blot证实获得纯度较高的MaTf重组蛋白；抑菌试验表明,MaTf重组蛋白对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黏质沙雷氏菌均有明显的抑菌作用;用MaTf重组蛋白制备多克隆抗血清,Western blot免疫印记法分析转铁蛋白在体内的表达特征,结果显示其在肝脏、脾脏、肾脏、心脏4个组织中的表达量为:肝脏＞脾脏＞肾脏＞心脏,与MaTf在RNA水平上的表达特征具有相似性.研究为探索转铁蛋白在黄喉拟水龟非特异性免疫反应中的作用提供了重要信息.