胰腺癌细胞株PANC1异常甲基化miRNA的分析

• 作者: 张立洁 彭泉 苗毅 蔡辉华 赵成功 钱祝银 高文涛
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺肿瘤 DNA甲基化 微RNAs TA克隆
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12
• 分类号: R735.9
• 字数: 2244字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.01.004

摘要

目的 分析胰腺癌细胞株PANC1与正常胰腺组织表达有差异的启动子区甲基化miRNA,寻找与胰腺癌相关的高甲基化miRNA.方法 抽提PANC1与正常胰腺组织基因组DNA,超声断裂.应用抗5-甲基化嘧啶核苷抗体和免疫磁珠法获取甲基化DNA片段.通过DNA甲基化芯片筛选出PANC1与正常胰腺组织表达差异的高甲基化miRNA,采用重亚硫酸盐修饰的PCR (BSP)和TA克隆测序的方法进行验证.提取胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1、SW1990基因组DNA,采用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)验证芯片筛选出的差异表达的甲基化miRNA.结果 PANC1细胞与正常胰腺组织存在8个差异表达的甲基化miRNA,从中挑选出5个进行BSP+ TA克隆测序验证,其中miR-615、miR-663、miR-663b在PANC1细胞的甲基化率明显高于正常组织(60.6％比7.6％,88.8％比22.2％,94.4％比13.0％)；miR-675的甲基化率与正常胰腺组织无明显差异(76.0％比100％)；miR1826因测序结果误差较大而舍去.经COBRA验证,PANC1的上述4种miRNA均高甲基化；BxPC除miR-675外,其他3种均高甲基化；CFPAC1的miR-663、miR-663b高甲基化；SW1990的miR-615、miR-663高甲基化.结论 胰腺癌细胞株与正常胰腺组织间存在差异表达的高甲基化miRNA,其中miR-663高甲基化与胰腺癌可能相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗毅	南京医科大学第一附属医院普外科	218	1362	17.0	27.0
2	钱祝银	南京医科大学第一附属医院普外科	69	309	9.0	15.0
3	蔡辉华	南京医科大学第一附属医院普外科	19	83	6.0	9.0
4	高文涛	南京医科大学第一附属医院普外科	32	134	6.0	10.0
5	赵成功	解放军第105医院普外科	18	107	7.0	9.0
6	彭泉	解放军第105医院普外科	11	33	3.0	5.0
7	张立洁	解放军第105医院肿瘤科	5	5	1.0	2.0