黄曲霉尿酸氧化酶在毕赤酵母中的分泌表达及纯化

• 作者: 刘志刚 徐雪荣 成细瑶 曾雨雷 杨康 杨波 胡征 邓贝
• 来源期刊: 食品与发酵科技
• 学科: 工学
• 关键词: 黄曲霉 尿酸氧化酶 毕赤酵母 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 页码范围: 20-24
• 分类号: TQ926.2
• 字数: 4070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-506X.2012.04-006

摘要

从黄曲霉(Aspergillus flavus)中钓取尿酸氧化酶(UOX)基因,并将该基因以正确的阅读框插入到载体pPIC9K,构建成pPIC9K-UOX重组分泌表达载体.用Sal I线性化处理重组表达载体,电击法转化毕赤酵母(GS115)感受态细胞,G418浓度梯增法筛选多拷贝阳性转化子.0.5%甲醇诱导后的上清经SDS-PAGE电泳检测,证明重组尿酸氧化酶成功分泌到培养基中;由阴离子层析柱纯化产物,目的蛋白纯度可达90%;体外活性测定具有分解尿酸的能力.毕赤酵母(GS115)成功分泌表达了黄曲霉尿酸氧化酶.