美洲斑潜蝇SS-PCR检测技术研究

• 作者: 万方浩 刘万学 吕志创 张桂芬 申香菊 郭建英
• 来源期刊: 生物安全学报
• 学科: 农学
• 关键词: 美洲斑潜蝇 线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因 快速鉴定 种特异性引物 分子检测
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 技术前沿
• 页码范围: 74-78
• 分类号: S433
• 字数: 4392字
• 语种: 中文

摘要

[背景]美洲斑潜蝇是一种严重威胁瓜果蔬菜、烟草、棉花等经济作物和花卉生产的入侵性害虫.由于潜叶蝇类害虫体型较小、生活方式隐蔽、形态相似,本文针对其难以快速准确地进行形态鉴别的问题,以美洲斑潜蝇为研究对象,以菜田常见的4种潜叶蝇类害虫为参照,采用种特异性PCR方法(species-specific PCR,SS-PCR),研究其快速分子检测鉴定技术.[方法]调用GenBank中一段936 bp的美洲斑潜蝇线粒体DNA (mtDNA)细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因(COI)的序列(Gen-Bank登录号为EU219613),并根据此基因片段的碱基序列设计引物1对,其扩增片段大小为294 bp.[结果]种特异性检验结果显示,该引物只对美洲斑潜蝇的COI基因具有扩增能力,对其他种类如南美斑潜蝇、三叶斑潜蝇、葱斑潜蝇、豌豆潜叶蝇等没有扩增能力.该引物不仅对成虫具有良好的扩增效果,对蛹、幼虫以及单粒卵也具有同样的扩增效果,其最低检出阈值为1/3840头成虫.[结论与意义]SS-PCR技术体系可用于美洲斑潜蝇的鉴定识别与检测监测,对阻止其进一步扩散蔓延具有重要意义.