犬瘟热病毒小熊猫株反向遗传系统的构建及其鉴定

• 作者: 冯娜 刘玉秀 夏咸柱 姜雪 李天松 杨松涛 王照 王磊 王胜乐 王铁成 许微微 赵永坤 高玉伟 黄耕
• 来源期刊: 兽类学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬瘟热病毒小熊猫株 反向遗传系统 构建
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 149-155
• 分类号: Q75
• 语种: 中文

摘要

以驯化致弱的犬瘟热病毒小熊猫株(Canine distemper virus,CDV)为模板,构建犬痘热病毒感染性cDNA克隆.对其全基因组序列测定后,用RT-PCR的方法获得组成全长基因的7个片段,通过酶切、拼接将7段CDVcDNA序列插入到真核表达载体pCI的MCS上,构建犬瘟热病毒小熊猫株的全长cDNA质粒(pCI-CDV-LP),同时分别克隆CDV小熊猫株N、P、L蛋白ORF构建三个辅助质粒.酶切鉴定和序列测定表明,pCI载体中插入的核酶及CDV cDNA序列正确无误,使用转染试剂Lipofectamine TM 2000将全长质粒和三个辅助质粒共转染中国仓鼠肾细胞(BSR),经RT-PCR、间接免疫荧光和病毒感染VERO-SLAM细胞试验鉴定,成功拯救出CDV小熊猫株,显示CDV小熊猫株反向遗传系统构建完成,为犬瘟热病毒致病机理及免疫研究奠定基础.