双抗体夹心ELISA检测水牛γ-干扰素方法的建立及初步应用

• 作者: 刘棋 徐贤坤 曾宪垠 熊毅 龙剑明
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 结核病 IFN-γ ELISA ESAT-6/CFP-10 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 10-16
• 分类号: S855.2
• 字数: 6717字
• 语种: 中文

摘要

纯化2株针对水牛γ-干扰素的单克隆抗体,其中1株进行HRP标记作为检测抗体,另1株单抗作为捕获抗体,建立检测水牛γ-干扰素的双抗体夹心ELISA (DAS-ELISA).通过对封闭液、抗体稀释液等条件进行优化,经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为625 ng/mL,检测抗体的工作效价为1∶100；所建立的DAS-ELISA方法检测灵敏度25 ng/mL,批内变异系数为0.52％-6.86％,批间变异系数为5.6％-7.07％.采集60头单次皮内注射结核菌素的水牛肝素钠抗凝全血,利用牛结核杆菌特异性抗原rHIS-CFP10/ESAT-6融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA检测所有样本,与皮内变态反应试验比较,结果显示,自制夹心ELISA方法检测水牛结核病的敏感性为62％,特异性为87％,符合率为75％,表明可应用于水牛结核病的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐贤坤		13	66	5.0	7.0
3	熊毅		29	113	6.0	8.0
4	龙剑明	广西大学动物科学技术学院	9	48	4.0	6.0
7	曾宪垠		65	343	12.0	15.0
9	刘棋		4	21	3.0	4.0