透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞Cyclin D1 mRNA表达的影响

• 作者: 刘献祥 叶蕻芝 曾宗鹏 李西海 杨建萍 翁霞萍 郑志 郑春松 陈加守
• 来源期刊: 中医正骨
• 学科: 医学
• 关键词: 骨关节炎 透骨消痛胶囊 细胞周期蛋白D1 软骨细胞 含药血清
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3-7
• 分类号: R285.5
• 字数: 4267字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6015.2012.07.001

摘要

目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的可能作用机制.方法:采用抽签法将16只12周龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组4只.低剂量组按5 mL·kg-体质量以5 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,中剂量组按5 mL·kg-体质量以10 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,高剂量组按5 mL·kg-1体质量以20 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,空白组按5 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃.每天灌胃2次,连续7d,最后1d连续2次灌胃,中间间隔2h.末次灌胃后3h提取各组实验兔含药血清低温保存备用.将6只4周龄雄性新西兰兔处死,取其膝关节软骨,置入盛有Ⅱ型胶原酶的培养皿中进行消化,建立软骨细胞体外培养体系,并采用甲苯胺蓝染色法鉴定细胞功能.将体外培养的第3代软骨细胞随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,并分别加入含空白血清、低剂量中药血清、中剂量中药血清、高剂量中药血清的DMEM培养液中继续培养72 h后,采用MTT法检测软骨细胞的增殖情况,采用RT - PCR法检测CyclinD1 mRNA的表达,并在透射电子显微镜下观察细胞形态.结果:Ⅱ型胶原酶消化法成功建立了软骨细胞的体外培养体系,甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒.干预72 h后,各组软骨细胞光密度值比较,差异有统计学意义(F=6.209,P=0.004)；中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于空白组(P=0.005,P=0.002)；中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于低剂量组(P =0.034,P=0.011).各组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=8.262,P=0.001)；中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于空白组(P=0.002,P=0.001)；中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于低剂量组(P =0.012,P=0.004)；中剂量组、高剂量组可见较多处于分裂期的细胞.结论:透骨消痛胶囊的含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA的表达,从而促进软骨细胞增殖,这可能是透骨消痛胶囊在临床上治疗骨性关节炎具有较好疗效的部分机理,而有关透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的具体作用机制还需作更进一步的深入研究,以便为临床应用提供理论依据.