猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3/GP5/M真核表达载体的构建及其体液免疫应答

• 作者: 刘学荣 刘建斌 吕志慧 杜平 牟克斌 王凡 祝秀梅 马全英
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3蛋白 GP5蛋白 M蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1266-1272
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4773字
• 语种: 中文

摘要

本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3、GP5和M蛋白的真核重组质粒.以PRRSV LN株为模板,采用PCR方法扩增出GP3、GP5、M基因片段,将扩增的GP5、M通过Linker序列串联成GP5-M,然后将GP3与GP5-M双酶切后插入peDNA3.1(+)构建重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,将其转染COS7细胞.PCR鉴定表明重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M含有PRRSV GP3、GP5-M基因,间接免疫荧光检测表明GP3、GP5-M蛋白在COS7细胞内获得表达.Western blotting检测证实GP3、GP5、M蛋白获得正确表达,并且所表达的GP3、GP5、M蛋白是融合蛋白.将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫BALB/c小鼠,首免后2周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周中和抗体效价最高可达1∶32.进一步将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫断奶仔猪,首免后4周即可产生1∶4～1∶8的中和抗体.本试验成功构建了表达PRRSV GP3、GP5和M融合蛋白的真核重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,中和抗体检测表明pcDNA3.1-GP3-GP5 M具有良好的免疫原性,从而为PRRSV基因工程疫苗的研制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	祝秀梅		11	43	4.0	6.0
2	王凡		11	58	5.0	7.0
3	吕志慧		5	27	3.0	5.0
4	马全英		9	42	4.0	6.0
5	刘学荣		31	138	6.0	10.0
6	刘建斌	中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所	60	417	10.0	19.0
7	杜平		11	16	2.0	3.0