深海放线菌Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652遗传操作系统的建立

• 作者: 张云 张长生 朱清华 李军 李文均 田新朋 鞠建华 马俊英
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: M.thermotolerans SCSIO 00652 NRPSs sl02-A s63-A PCR-Targeting 接合转移 松弛培养
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传育种与生物合成
• 页码范围: 105-111
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8689.2012.02.006

摘要

目的 建立深海放线菌Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652菌株的遗传操作系统,通过基因阻断研究次级代谢产物的生物合成途径.方法 在对该菌株的全基因组进行测序的基础上,以基因组序列中编码非核糖体肽合成酶(Nonribosomal peptide synthetase,NRPSs)的基因sl02-A和s63-A为目标基因,利用PCR-targeting介导的基因置换技术构建了重组质粒,在加有3％海盐的培养基上,通过ET12567/pUZ8002属间接合转移导入SCSIO 00652野生菌.结果 接合子通过一代、二代松弛培养都无法得到双交换突变菌株,松弛培养四代后经抗性筛选,双交换率明显提高,PCR分析结果显示s102-A基因和s63-A基因均被成功阻断,HPLC分析结果显示突变株的发酵产物与野生型菌株有一定的差异.结论 成功建立了深海放线菌M.thermotolerans SCSIO 00652的遗传操作系统,为对其它基因进行遗传学操作奠定了基础.