核酸杂交酶联桥接分析系统定量分析寡核苷酸

• 作者: 付洁 周磊 孙云娟 宋海峰 欧伦 王清清 董立厚 高新
• 来源期刊: 分析化学
• 学科: 生物学
• 关键词: 寡核苷酸 药代动力学 定量 核酸杂交 酶联桥接分析系统
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 503-509
• 分类号: Q524
• 字数: 4781字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1096.2012.10435

摘要

建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析.对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4 DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化,确定使用中性亲和素包被的酶标板,俘获探针与检测探针浓度比为2∶3,S1酶为40 U/孔,显色15min为最优条件,并考察了生物基质效应和稀释效应对方法的影响,建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法,并进行方法学确证,方法学定量范围为0.10～6.25 nmol/L.本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量(1 mg/kg)静脉滴注后的药代动力学研究,成为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段.