Dvl2-DIX结构域的SiteⅢ相关突变体结晶及其与Ccd1-DIX的共结晶

• 作者: 但琼洁 刘奕彤 吴嘉炜 王志新
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: Wnt信号通路 Dishevelled DIX结构域 结晶
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 647-654
• 页数: 8页
• 分类号: Q71
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1206.2012.00216

摘要

Dvl(Dishevelled)是Wnt信号通路传递的核心分子,无论内源的还是过表达的Dvl在细胞体内都能因自聚而形成puncta.研究已报道,Dvl主要通过其DIX结构域上的三个作用区域来介导自聚:SiteⅠ、SiteⅡ和SiteⅢ,其中SiteⅠ和SiteⅡ还参与了DvI-DIX与Ccd1-DIX的异聚.为了进一步得到Dvl2-DIX上SiteⅠ和SiteⅡ的直接三维结构,本研究设计了一系列的SiteⅢ突变体.通过体内和体外实验进一步证实了这些突变氨基酸确实参与了Dvl2-DIX的自聚,然后对这些SiteⅢ突变体蛋白成功地进行了纯化和结晶,最终得到3.1(A)的Dvl2-DIX(G65A)晶体数据.分析表明该晶体存在片层位移现象,需对数据进行一定修正后才能进行后续的结构分析.体外实验又证实了这些突变氨基酸不影响Dvl2-DIX与Ccd1-DIX的异聚,为了进一步研究Dvl2-DIX与Ccd1-DIX相互作用,我们对这些SiteⅢ突变体蛋白与Ced1-DIX进行共结晶.最终获得Dvl2-DIX (G65A)与Ccd1-DIX复合物的初晶,利于进一步的晶体优化及数据收集.