人胰岛素原密码子的优化及其在毕赤酵母中的表达

• 作者: 凌雪萍 卢英华 史莹飞 敬科举
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰岛素原 基因改造 高拷贝 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 101-106
• 分类号: Q815
• 字数: 4217字
• 语种: 中文

摘要

依据毕赤酵母偏好密码子,设计合成长效人胰岛素原( human proinsulin,HPI)基因序列,所合成的HPI基因全长为200 bp,并在其N端添加信号肽(EEAEAEAEPK)以提高目的蛋白表达.将改造后基因克隆到pPIC9K载体中,构建分泌表达型载体pPIC9K-HPI,转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中.用遗传霉素G418梯度筛选获得高拷贝菌株,在甲醇诱导下表达分子质量为7.87 ku的HPI,利用金属螯合层析纯化蛋白质,胰蛋白酶酶切后利用人胰岛素试剂盒测得生物活性,HPI摇瓶最高产量可达35.4mg/L.该研究为获得大量长效胰岛素基因工程产品奠定研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	敬科举	厦门大学化学化工学院	18	91	6.0	8.0
2	卢英华	厦门大学化学化工学院	73	723	13.0	23.0
3	凌雪萍	厦门大学化学化工学院	31	244	8.0	14.0
4	史莹飞	厦门大学化学化工学院	1	5	1.0	1.0