体外RNAi对S100A4基因表达及其对骨肉瘤细胞侵袭、转移能力的影响

• 作者: 吕刚 商冠宁 安贵峰 杨毅欣 王岩峰 马旭
• 来源期刊: 大连医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 骨肉瘤 S100A4 侵袭 转移
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础科学
• 页码范围: 36-41
• 分类号: R738.1
• 字数: 3613字
• 语种: 中文

摘要

[目的]应用RNAi技术抑制人骨肉瘤MG-63细胞S100A4基因的表达,并观察对MG-63细胞增殖及体外侵袭能力的影响.[方法]合成针对S100A4的siRNA载体,并根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列及非特异性的siRNA.将培养细胞分为C组(空白对照组)；C1组(转染脂质体组)；C2组(转染非特异性的siRNA 组)；S1、S2、S3组(转染特异性的siRNA Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组).荧光倒置显微镜下观察转染情况,Real-time PCR方法检测转染前后S100A4基因表达变化,应用Western-Blot方法检测转染前后S100A4蛋白表达变化.筛选出转染效率最高的特异性siRNA组作为后续实验的实验组.后续实验分为正常细胞组,阴性对照组和实验组,应用MTT法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭及转移能力变化.[结果]倒置显微镜下C2组与S1、S2、S3组培养细胞的细胞浆均可见绿色荧光.S1、S2与S3组的S100A4 mRNA表达水平均有不同程度的下调,以S3组最为显著.Western-Blot检测S100A4蛋白表达结果与其相符.MTT法和平板克隆形成实验均显示S3组细胞增殖受到抑制,与正常细胞组、阴性对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).Transwell小室实验显示RNA干扰S100A4基因表达后肿瘤细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,与正常细胞组、阴性对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05).[结论]体外合成的S100A4特异性siRNA能够抑制骨肉瘤细胞系MG-63的S100A4表达,进而抑制细胞的增殖和体外侵袭能力.