亚洲棉7号染色体分离及文库构建

• 作者: 刘方 刘玉玲 张香娣 彭仁海 王坤波 王春英 王玉红 黎绍惠
• 来源期刊: 棉花学报
• 学科: 农学
• 关键词: 亚洲棉 显微切割 微克隆
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与进展
• 页码范围: 379-385
• 页数: 7页
• 分类号: S562.035
• 字数: 4444字
• 语种: 中文

摘要

采用前低渗、酶解、后低渗和盖片轻压相结合的方法,建立了激光法分离二倍体亚洲棉石系亚1号单条染色体技术.单染色体经去蛋白、酶切和PCR扩增后,产物以Southern杂交、简单重复序列(Simple sequence repeats,SSR)引物扩增和荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)进行验证,构建了棉花单条染色体文库.克隆片段长度在150～1000 bp,平均为550 bp;文库包含1.38×105个克隆,覆盖染色体长度1倍左右,空载率为1％,滴度为1.3×106 pfu· mL-1,单一拷贝和低拷贝比例达到59％以上,为该条染色体分子标记的筛选、重要基因克隆和定位、遗传图谱的饱和奠定基础.