防御素5和LL37真核重组质粒构建及转染人阴道上皮细胞的研究

• 作者: 孙蓓 尹利荣 王芳
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 防御素类 阴道 上皮细胞 细胞培养技术 质粒 LL37
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 466-470
• 分类号: R446.122
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2012.05.016

摘要

目的:构建防御素5(HD5)和LL37的真核重组质粒并瞬时转染人阴道上皮细胞,以期探讨阴道上皮细胞抵抗微生物感染的机制.方法:(1)从人阴道上皮细胞中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出HD5和LL37的cDNA,并将其插入真核表达载体pcDNA3.1 (+)-EGFP中、构建重组质粒pcDNA3.1 (+)/HD5-EGFP和pcDNA3.1(+ )/LL37-EGFP.(2)经组织块法原代培养入阴道上皮细胞并传代,将2种质粒分别或联合转染人阴道上皮细胞,转染6、12、24和48 h后,采用荧光显微镜检测细胞转染情况,ELISA方法测定细胞培养上清液中HD5及LL37的表达情况.结果:成功构建了pcDNA3.1( +)/HD5-EGFP和pc DN A3.1(+ )/LL37-EGFP真核表达载体,实现了HD5和LL37在阴道上皮细胞中表达,细胞培养上清中有HD5和LL37蛋白分子表达,且在转染24h时表达量最高.联合转染组的HD5和LL37水平高于单独转染组,单独转染组高于未转染组,差异均有统计学意义(均P＜0.001).LL37组和联合转染组的LL37水平,联合转染组的HD5水平均是6h时分泌最低,24h达高峰,然后呈下降趋势.HD5组的HD5水平随时间增加而呈增加趋势.结论:HD5和LL37成功转染人人阴道上皮细胞并成功表达,为研究重组HD5和LL37的抗菌功能及阴道上皮细胞先天免疫机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹利荣	天津医科大学第二医院妇科	102	526	11.0	16.0
2	孙蓓	天津医科大学内分泌研究所	48	174	8.0	10.0
3	王芳	天津医科大学第二医院妇科	41	112	6.0	7.0