赤霉素产生菌原生质体制备、纯化与再生工艺的研究

• 作者: 张文宣 朱江萍 赵南
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 赤霉菌菌丝体 原生质体 复合破壁酶 诱变育种
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传育种与生物合成
• 页码范围: 276-279,297
• 分类号: Q933
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8689.2012.04.007

摘要

目的 对赤霉素产生菌原生质体进行制备、纯化、再生工艺改进与完善.方法 本文通过微孔滤膜作载体,在含甘氨酸的菌丝生长培养基固体平板上,培养取得幼嫩菌丝体,并对原生质体制备时的复合破壁酶液组分配比、酶解时间,原生质体纯化再生工艺进行了改进和完善.结果 实验证明:①在幼嫩菌丝体的制备过程中,采用微孔滤膜平板法培养幼嫩菌丝体,易于控制菌龄,生长在微孔滤膜上的菌丝体不混杂有多余的培养基成份,不必经洗涤,可直接酶解,简化了实验步骤;②在原生质体制备过程中,采用以纤维素酶2％+蜗生酶1％+果胶酶0.4％作为复合破壁酶液的组成,可使原生质体的释放量从105升至106;③在原生质体纯化过程中,采用先慢速离心沉淀,后洗涤滤除菌丝断片的操作方法,可使无壁娇嫩易碎的原生质体可依附菌丝断片作缓冲载体一起沉淀,有利于纯化收集到完整的原生质体,提高原生质体的活性再生;④在原生质体再生过程中,选用含有聚胨、酵母膏成份的RM再生培养基,可使原生质体的再生率达到16％以上.结论 原生质体制备、纯化、再生工艺的改进与完善,确保了诱变育种基因突变后的遗传个体绝大部分都是纯合体,避免了高产性状经传代后水平回复的现象,为赤霉素理化诱变育种工作的顺利开展创造了良好条件.