双载体转重链Tyr664Cys和轻链Thr1286Cys突变体BDD-FⅧ基因

• 作者: 刘泽隆 屈慧鸽 朱甫祥 杨树德 缪静 迟晓艳
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 凝血Ⅷ因子 双载体 链间二硫键 重链分泌
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 18-24
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

用双载体转运凝血Ⅷ因子基因在甲型血友病基因治疗研究中可克服AV毒载体容量限制,但存在重链分泌低效和链不均衡性问题.为探索重、轻链间二硫键形成对重链分泌的促进作用,该文用双载体转B结构域大部缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)的重链和轻链基因,将重链的Tyr664和轻链Thr1826突变为Cys,研究了HEK293细胞共转基因后的基因表达、分泌至培养上清的重链量和凝血生物活性.用Western blot检测细胞裂解液结果显示,非还原条件下有明显的二硫键交联的重、轻链蛋白；链特异性ELISA定量检测细胞分泌的重链为(125±29) ng/mL,明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞的(75±23) ng/mL; Coatest法显示细胞分泌的凝血活性为(0.78±0.29) U/mL,也明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞(0.34±0.12) U/mL.结果表明,重、轻链间的二硫键形成 可提高双载体转FⅧ基因的功效,为进一步在动物体内转基因提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	屈慧鸽		72	330	10.0	15.0
2	刘泽隆		49	99	7.0	9.0
3	缪静		57	250	10.0	14.0
4	朱甫祥		38	21	3.0	4.0
5	迟晓艳		47	54	4.0	6.0
6	杨树德		27	167	6.0	12.0