东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry 的表达和酶活分析

• 作者: 刘殿辰 周鲁明 孙欢欢 赵博生
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: 东亚三角涡虫 胰蛋白酶 蛋白表达 酶活
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 609-614
• 分类号: Q55
• 字数: 4669字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1005.2012.00609

摘要

通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry 氨基酸序列比对分析,发现保守的催化三联体结构中第一位的His 被Lys 所取代.为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响,文章构建了原核表达重组质粒pET-28a-Djtry,转化到E.coli BL21 中,利用IPTG 诱导表达,对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Western blotting 鉴定,获得成分均一的活性蛋白.利用牛胰蛋白酶为标准品,胰蛋白酶特异性底物BAEE,检测Djtry 酶活力与比活力.SDS-PAGE 电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体,分子量约为26 kDa,Western blotting 结果显示为目的蛋白,对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现,突变型胰蛋白酶Djtry 仍然保持了胰蛋白酶催化性质,但是催化活性相对较弱.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵博生	山东理工大学生命科学学院发育与进化生物学实验室	38	125	6.0	10.0
2	孙欢欢	山东理工大学生命科学学院发育与进化生物学实验室	5	13	2.0	3.0
3	周鲁明	山东理工大学生命科学学院发育与进化生物学实验室	3	3	1.0	1.0
4	刘殿辰	山东理工大学生命科学学院发育与进化生物学实验室	3	4	1.0	1.0