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摘要:
背景 紫红质通道蛋白2(ChR2)是从单细胞绿藻莱茵衣藻上分离的一种光敏感通道蛋白,可作为光刺激神经细胞的手段,与电、磁和超声波相比,光在时间和空间上对神经细胞的刺激将更精确. 目的 构建负载ChR2基因的重组腺病毒,并鉴定其功能.方法 将人胚肾293( HEK293)细胞在含质量分数10%胎牛血清的DF12培养基中进行培养及传代.腺病毒穿梭质粒pSB291-hCHR2-GFP与腺病毒包装质粒pBHGlox △E1,3 Cre共转染HEK293,包装得到少量负载ChR2基因的重组腺病毒(Ad-ChR2),经HEK293细胞扩增、CsCl梯度离心,Tris-HCl透析后得到纯化Ad-ChR2.获取4只出生1d的清洁级Long Evans大鼠视皮层组织,用组织块培养法利用无血清培养基原代培养视皮层细胞,用纯化的Ad-ChR2转染培养的视皮层细胞,当转染成功的视皮层细胞表达绿色荧光时给予460 nm蓝光刺激,应用膜片钳技术记录视皮层细胞的动作电位.结果 纯化浓缩后的Ad-ChR2滴度可达7.9×1010PFU/ml,HEK293细胞转染Ad-ChR2 24 h后倒置荧光显微镜下即可见细胞膜上有绿色荧光表达,转染13d可见细胞由扁平变为圆形.无血清培养的视皮层细胞转染纯化的Ad-ChR2后细胞膜上可见绿色荧光蛋白(GFP)的表达,460 nm蓝光刺激后用膜片钳技术可记录到蓝光诱发的视皮质细胞的动作电位.结论 本研究成功构建了负载ChR2基因的重组腺病毒表达载体,并证实ChR2能够感染有功能的视皮质细胞,这对视觉可塑性方面的研究非常重要.
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内容分析
关键词云
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文献信息
篇名 负载紫红质通道蛋白2重组腺病毒的包装及功能鉴定
来源期刊 中华实验眼科杂志 学科 医学
关键词 紫红质通道蛋白2 腺病毒 膜片钳
年,卷(期) 2012,(8) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 681-685
页数 分类号 R734.2
字数 4573字 语种 中文
DOI 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2012.08.003
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 阴正勤 第三军医大学西南医院眼科 169 709 12.0 17.0
2 侯文生 重庆大学生物工程学院 97 724 15.0 21.0
3 翁传煌 第三军医大学西南医院眼科 16 44 3.0 5.0
4 王浩 第三军医大学西南医院眼科 5 15 2.0 3.0
5 姚军平 重庆大学生物工程学院 3 4 2.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
紫红质通道蛋白2
腺病毒
膜片钳
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华实验眼科杂志
月刊
2095-0160
11-5989/R
大16开
郑州市纬五路7号河南省眼科研究所&河南省立眼科医院院内
36-13
1980
chi
出版文献量(篇)
6131
总下载数(次)
29
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
论文1v1指导