表达外源基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆的构建及病毒拯救

• 作者: 周艳君 姜一峰 徐彦召 李玲 童光志 童武
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 感染性cDNA 标记基因 拯救病毒
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 473-480
• 分类号: S858.28
• 字数: 5137字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.05.002

摘要

为建立表达标记基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,本研究在PRRSV HuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将新城疫病毒(NDV)NP蛋白末端优势抗原区插入PRRSV NSP2蛋白的复制非必须区,经基因片段的克隆、拼接,构建了含有外源标记基因的感染性的PRRSV cDNA克隆psk-HuN4-F112-△52+NP49.用限制性内切酶SwaⅠ将psk-HuN4-F112-△52+NP49线性化后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法将病毒RNA转染叙利亚仓鼠肾细胞(BHK-21)包装出病毒粒子,再转接到猴胚胎肾上皮细胞(MACR-145)传代拯救病毒.对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定.结果表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(病毒基因组14667位人工产生的Mlu Ⅰ酶切位点)和插入的标记基因序列.间接免疫荧光试验表明,外源基因NP49在拯救的PRRSV中表达,且能够在PRRSV传代过程中稳定遗传.病毒生长特性比较显示,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性.本研究构建了含有标记基因PRRSV的感染性克隆并获得了拯救病毒,为进一步开发新型PRRS疫苗提供了有效的反向遗传操作平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童光志	中国农业科学院上海兽医研究所	168	2158	24.0	40.0
2	李玲	中国农业科学院上海兽医研究所	68	200	8.0	12.0
3	周艳君	中国农业科学院上海兽医研究所	54	442	10.0	19.0
4	童武	中国农业科学院上海兽医研究所	22	185	6.0	13.0
5	徐彦召	中国农业科学院上海兽医研究所	11	28	2.0	5.0
6	姜一峰	中国农业科学院上海兽医研究所	17	136	4.0	11.0