鳗源迟缓爱德华氏菌菌蜕的构建及制备条件优化

• 作者: 付小哲 余露军 刘礼辉 吴淑勤 常藕琴 李宁求 林强 石存斌 黄志斌
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鳗鲡 迟缓爱德华氏菌 菌蜕 条件优化
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 页码范围: 1754-1762
• 分类号: Q784|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2012.28079

摘要

菌蜕具有完整细菌表面抗原结构,可诱导机体的体液和细胞免疫应答,成为疫苗制备的候选之一,为了探讨鳗鲡迟缓爱德华氏菌菌蜕疫苗的可行性,实验采用基因重组技术构建了噬菌体PhiX174裂解酶基因(Lysis E)的温控表达载体,转化迟缓爱德华氏菌,成功制备其菌蜕,并对菌蜕形态、溶菌动力学、裂解效率以及制备条件等进行了研究.结果表明,细菌菌蜕表面形成溶菌孔道,细胞因内容物流失而发生明显的皱缩；构建的迟缓爱德华氏菌诱导后1h开始裂解,5h后裂解基本完成,裂解效率为99.99％,冷冻干燥后重悬涂布平板,未检出活菌,电镜观察表明冻干前后细胞形态未见明显变化；构建的迟缓爱德华氏菌分别在OD600值为0.4和0.6进行诱导,其裂解过程和裂解效率没有明显区别；分别用LB、BHI、NB 3种培养基进行比较研究,其中LB培养基制备的菌蜕细胞较完整、裂解完全,是制备迟缓爱德华氏菌菌蜕最优培养基.本研究成功构建了鳗源迟缓爱德华氏菌菌蜕,并对其制备条件进行了优化,为鳗鲡爱德华氏菌病疫苗开发奠定了基础.