鸭黄病毒巢式PCR检测方法的建立和应用

• 作者: 张琳 张秀美 杨少华 胡北侠 许传田 颜世敢
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄病毒 通用引物 巢式PCR 鸭 敏感性
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 124-129
• 分类号: S852.65
• 字数: 4997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0384.2012.02.003

摘要

参照GeneBank已登录的黄病毒基因序列设计通用引物,建立基于黄病毒通用引物的巢式PCR检测体系,为黄病毒特别是新发黄病毒提供了高效的检测方法.该方法通过基因组的比对,选择NS5基因保守区设计了4条通用简并引物Flav P1～Flav P4,在此基础上建立了巢式PCR反应体系,并应用到鸭黄病毒的检测中.该体系仅能扩增鸭黄病毒目的基因而不能扩增其他病毒,且敏感性达到90 copies·μL-1,比普通PCR高出1 000倍.同源性和进化分析表明,鸭黄病毒属蚊媒黄病毒类恩塔亚病毒群,与坦布苏病毒及近期发现的BYD病毒关系最近.以上结果表明,设计的黄病毒引物具有良好的通用性和特异性,其巢式PCR敏感性高,该体系成功地进行了鸭黄病毒的检测,验证了该方法的敏感性和特异性.