表达大肠杆菌分子伴侣GroEL、 GroES和GrpE载体的构建及其应用

• 作者: 王蕾蕾 程备久 范军 许鹏
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 分子伴侣 大肠杆菌 表达载体 粘性末端PCR技术 蛋白可溶性
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 46-51
• 分类号: Q71
• 字数: 4058字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2012.01.010

摘要

大肠杆菌(Escherichia coli)共表达系统常要求质粒具有不同抗生素抗性以及不同的复制子.利用粘性末端PCR技术,以含有大肠杆菌分子伴侣基因GroEL、GroES和GrpE的pR-GESP质粒为模板,设计两对引物,通过两次独立的PCR反应扩增3个基因的多顺反子,将形成粘性末端的PCR产物插入NcoI和XhoI酶切的pACY-CDuet-1质粒,构建的pA-GESP质粒具有p15A复制子及氯霉素抗性,和具有ColE1复制子及卡那霉素抗性表达载体pET28b相容.SDS-PAGE显示含有pA-GESP质粒的大肠杆菌细胞中3个分子伴侣蛋白的表达水平和含有pR-GESP质粒的大肠杆菌细胞没有明显差异,它们对玉米丝氨酸消旋酶的可溶性表达有部分促进作用,但对N端含有组氨酸标签的玉米铁氧还蛋白还原酶的表达没有作用,在三个含有不同抗生素基因的质粒中共表达分子伴侣、5-氨基乙酰丙酸合酶和尿卟啉原Ⅲ甲基化酶,两个酶连续催化的荧光产物在细胞内积累量为562.13±3.17/OD600,而没有分子伴侣的积累量为457.66±4.98/0D600,表明分子伴侣改善部分蛋白在大肠杆菌的可溶性表达和催化功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程备久	安徽省作物生物学重点实验室安徽农业大学生命科学学院	3	16	2.0	3.0
2	范军	安徽省作物生物学重点实验室安徽农业大学生命科学学院	3	16	2.0	3.0
3	许鹏	安徽省作物生物学重点实验室安徽农业大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
4	王蕾蕾	安徽省作物生物学重点实验室安徽农业大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0