慢病毒介导的稳定沉默nm23-H1基因的肺癌细胞株的建立及生物学行为改变

• 作者: 吴志浩 周清华 孙丽亚 弓磊 来大兴 祖玲玲 罗猛 邱小明
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 慢病毒 RNA 基因
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 139-145
• 分类号: R734.2
• 字数: 3745字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2012.03.02

摘要

背景与目的 nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因.前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力.为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制,本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株.方法 将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-Hl基因表达,并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证,侵袭小室实验检测侵袭力改变.结果 逆 转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低；shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1正常表达；侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强.结论 成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99,nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强.