酵母双杂交系统筛选HBV PreS1相互作用蛋白

• 作者: 刘小静 刘敏 叶峰 孔颖 张曦 王小清 赵英仁 邸莹 陈天艳
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 酵母双杂交系统 PreS1蛋白 Sos招募系统 诱饵载体 蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 407-412
• 分类号: R512.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2012.04.003

摘要

目的 利用Sos招募系统(SRS),构建含HBV PreS1基因的酵母双杂交诱饵载体,筛选人肝细胞与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,进一步探讨HBV侵入肝细胞的机制.方法 以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,PCR扩增HBV PreS1基因,克隆到酵母表达载体pSos中,构建诱饵质粒pSos-PreS1,将其转化cdc25酵母感受态细胞,提取酵母蛋白质进行Western blot分析,证实其在酵母细胞中的表达;将pSos-PreS1分别与pMyr Lamin C、pMyr SB共转化酵母,证实诱饵蛋白无自激活作用.将pSos-PreS1与人肝cDNA文库共转化cdc25酵母感受态细胞,通过营养及温度选择性培养筛选阳性菌落,扩增阳性菌落目的基因并测序.结果 成功构建了HBV PreS1基因酵母双杂交诱饵载体pSos-PreS1,筛选得到5个准阳性克隆,序列分析表明其分别与人类钾通道调制因子1(KCMF1)、细胞色素C、VitD结合蛋白、人源去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)和人白蛋白具有高度同源性.结论 利用SRS筛选出5个可能与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,为进一步了解HBV侵入肝细胞的机制奠定了基础.