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新型环状引物荧光定量PCR检测乳腺癌组织HER2基因mRNA表达方法的建立
新型环状引物荧光定量PCR检测乳腺癌组织HER2基因mRNA表达方法的建立
作者:
刘国彦
张换敬
曾骥孟
李怡
郑立谋
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
乳腺肿瘤
基因,erbB-2
受体,erbB-2
聚合酶链反应
摘要:
目的 研究建立一种基于实时荧光定量PCR技术和新型环状引物的简捷、准确、廉价、易于标准化检测乳腺癌组织人表皮生长因子受体2(HER2)基因mRNA表达水平的方法,为临床上肿瘤个性化分子靶向药物治疗提供用药指导.方法 设计HER2和内参基因的新型特异性环状引物,通过Excel在乳腺癌组织标本中随机抽取5份标本检测候选内参基因的表达,同时用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件筛选和评估乳腺癌组织中稳定表达的内参基因,设置Mg2+浓度和引物浓度梯度对PCR体系进行优化,建立乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的新型环状引物Eva Green染料实时荧光定量逆转录(FQ RT)-PCR检测方法(以下简称“自建FQ RT-PCR”法),并对其灵敏度、特异性、稳定性进行评价;同时用自建FQ RT-PCR法与免疫组织化学(IHC)法平行检测2008至2012年厦门大学附属中山医院普外科收集的55份乳腺癌组织和其中32份同一患者匹配的正常组织(距癌组织≥5 cm)中HER2基因的表达水平,并评价自建FQ RT-PCR法对乳腺癌的诊断效能.结果 自建FQ RT-PCR法对HER2基因和核糖体蛋白L37a(RPL37A)基因的最低检测限均为101拷贝/μl,线性范围均为101~ 106拷贝/μl(r=0.997);HER2和RPL37A基因的高、低浓度标准品(106拷贝/μl和101拷贝/μl)批内变异系数(CV)分别为(5.93±0.57)%和(5.11±0.59)%、(2.49±0.81)%和(2.98±0.97)%;批间CV为(5.76±0.58)%和(7.71±0.61)%、(3.75±0.76)%和(4.40±0.96)%.FQ RT-PCR法与IHC法平行检测87份乳腺癌组织标本HER2基因表达水平,FQ RT-PCR法的敏感度为96.36%(53/55),特异度为78.13% (25/32),阳性预测值为88.33% (53/60),阴性预测值为92.59% (25/27),与IHC检测结果总符合率为89.66%(78/87).且与HIC法具有较高的一致性(Kappa=0.770,P>0.05).结论 成功建立了FQ RT-PCR检测乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的方法,该方法敏感度高、特异度好且快速、价廉,适合临床检验实验室进行肿瘤标本的HER2基因表达检测.
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内容分析
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文献信息
篇名
新型环状引物荧光定量PCR检测乳腺癌组织HER2基因mRNA表达方法的建立
来源期刊
中华检验医学杂志
学科
关键词
乳腺肿瘤
基因,erbB-2
受体,erbB-2
聚合酶链反应
年,卷(期)
2012,(11)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
1000-1005
页数
6页
分类号
字数
5303字
语种
中文
DOI
10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2012.11.008
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
刘国彦
厦门大学附属中山医院普外科
7
4
1.0
1.0
2
郑立谋
361005 厦门大学药学院转化医学中心
1
0
0.0
0.0
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
引文网络
引文网络
二级参考文献
(3)
共引文献
(137)
参考文献
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节点文献
引证文献
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同被引文献
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1992(1)
参考文献(1)
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2002(1)
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参考文献(2)
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参考文献(2)
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参考文献(2)
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2011(2)
参考文献(2)
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2012(0)
参考文献(0)
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引证文献(0)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
乳腺肿瘤
基因,erbB-2
受体,erbB-2
聚合酶链反应
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中华检验医学杂志
主办单位:
中华医学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1009-9158
CN:
11-4452/R
开本:
大16开
出版地:
北京市西城区宣武门东河沿街69号
邮发代号:
2-71
创刊时间:
1978
语种:
chi
出版文献量(篇)
7229
总下载数(次)
38
总被引数(次)
76070
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