铁皮石斛SCoT-PCR反应体系构建及优化

• 作者: 斯金平 章晓玲 赵瑞强 高燕会
• 来源期刊: 核农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 铁皮石斛 SCoT 正交设计 单因素试验 体系优化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 648-655
• 分类号: S823
• 语种: 中文

摘要

采用正交设计和单因素试验相结合的方法，对铁皮石斛的SCoT-PCR反应中5个因素（DNA模板、Mg^2＋、dNTPs、Taq酶和引物）进行优化试验。建立了适合铁皮石斛既稳定且多态性高的SCoT-PCR的最佳反应体：201~1PCR反应体系中含有1×Buffer、30ngDNA模板、2．5mmol·L^-1Mg^2＋、0．15mmol。L^-1dNTPs、1．5UTaqDNA聚合酶和0．4iμmol·L“引物。对铁皮石斛的SCoT-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验，发现本试验引物S6的退火温度为54．5℃，且最适退火温度因引物而异。这一优化的SCoT-PCR反应体系在32份铁皮石斛材料的验证中表现出良好的稳定性和重复性。该优化的SCoT-PCR反应体系为进一步进行铁皮石斛种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位和遗传多样性的分析奠定了技术基础。