柯萨奇病毒B3VP1重组腺病毒载体疫苗rAd/VP22-L-VP1的构建及表达

• 作者: 刘贵霞 张永红 李剑 米立国 蓝佳明 金玉怀
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 柯萨奇病毒B3 腺病毒载体 基因疫苗 单纯疱疹病毒1 型VP22 佐剂 组织工程
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1280-1284
• 分类号: R318
• 字数: 5622字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.033

摘要

背景:VP22 是单纯疱疹病毒1 型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)UL49 基因编码的碱性蛋白质,具有蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD),能够把与之融合的蛋白或与之结合的DNA 等大分子跨膜送递到邻近细胞,在基因靶向预防中表现出优势.目的:构建表达单纯疱疹病毒1 型VP22 与柯萨奇病毒B3 主要中和抗原VP1 融合蛋白的重组腺病毒载体疫苗,观察外源基因在HEK293 细胞中的良好表达.方法:PCR法扩增目的基因HSV-1 VP22 和CVB3 VP1,经Linker 连接,将VP22-L-VP1 插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,构建重组穿梭质粒AdTrack-CMV/VP22-L-VP1.再将此载体与腺病毒骨架载体pAdEasy-1 在大肠杆菌BJ5183 中进行同源重组,生成重组腺病毒质粒pAd/VP22-L-VP1,脂质体介导pAd/VP22-L-VP1 转染HEK293 细胞包装重组腺病毒rAd/VP22-L-VP1.HEK293 细胞上进行病毒扩增和滴定并检测外源基因的表达.结果与结论:构建的重组腺病毒载体pAd/VP22-L-VP1 经过第4 轮扩增,其滴度达到6.77×107 pfu/mL,体外感染293 细胞可见VP22 和VP1 融合蛋白的表达.说明实验成功构建并包装重组腺病毒rAd/VP22-L-VP1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李剑	河北医科大学病原生物学教研室	12	39	4.0	5.0
2	刘贵霞	河北医科大学病原生物学教研室	11	47	4.0	6.0
3	米立国	河北医科大学病原生物学教研室	16	50	4.0	6.0
4	蓝佳明	河北医科大学病原生物学教研室	13	45	4.0	6.0
5	张永红	河北医科大学病原生物学教研室	29	164	8.0	12.0
6	金玉怀	河北医科大学病原生物学教研室	52	231	9.0	11.0