新城疫病毒对人NK细胞表达TRAIL的促进作用

• 作者: 宋德志 梁莹 樊晓晖 殷君 王立芳 肖庆 赖振屏 高灵茜
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤,实验性 新城疫病毒 免疫疗法 TNF相关凋亡诱导配体 自然杀伤细胞
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 974-981
• 页数: 8页
• 分类号: R730.54
• 字数: 6737字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2012.12.005

摘要

目的:研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)刺激自然杀伤(natural killer,NK)细胞产生肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的作用机制.方法:采用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法,分离得到高纯度的NK细胞；乳酸脱氢酶释放法检测NDV激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用；实时荧光定量-PCR (real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测 NDV刺激NK细胞4h后对TRAIL mRNA表达水平的影响；FCM检测NDV刺激NK细胞16 h时TRAIL蛋白的表达情况；ELISA法检测NDV刺激NK细胞后对其分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响；最后采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,再采用FCM检测NDV刺激的NK细胞中TRAIL蛋白的表达情况.结果:FCM检测结果显示,分离得到的NK细胞的纯度达(90.60±1.15)％:NDV刺激NK细胞16h后,明显增强NK细胞的杀伤肿瘤作用,NDV效价为204.8 HU刺激组的杀伤率达到(22.28±0.84)％；RFQ-PCR及FCM检测结果显示,不同效价的NDV刺激NK细胞后,NK细胞中TRAIL mRNA及蛋白表达水平均明显升高；ELISA检测结果显示,NDV刺激NK细胞后IFN-γ的分泌水平明显增加,在NDV效价为25.6HU刺激16 h时达到峰值(796.47±37.87) pg/mL;采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,NK细胞中TRAIL蛋白表达水平明显下降.结论:NDV刺激NK细胞后可增强IFN-γ的分泌水平,进而通过IFN-γ上调TRAIL的表达,此途径为NDV刺激NK细胞表达TRAIL的机制之一.此外,NDV直接刺激NK细胞表达TRAIL是另一条重要的途径.