猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白部分片段的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒 李彬 温立斌 王小敏 茅爱华 郭容利
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌2型 MRP 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 80-85
• 分类号: S634.3
• 字数: 4611字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.01.015

摘要

为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21( DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别.以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法.该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1:50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清.当效价(S/P) ≥0.22时,判定待检血清样品为阳性；当S/P＜0.22时,判定待检血清样品为阴性.运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14 ～ 28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异.