梨小食心虫化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 仵均祥 刘彦飞 张国辉
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 梨小食心虫 化学感受蛋白 分子克降 序列分析 原核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 668-675
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

为了研究梨小食心虫Grapholita molesta化学感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)在化学感受系统中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆到一条梨小食心虫化学感受蛋白的全长cDNA序列,命名为GmolCSP(GenBank登录号:JQ821389).序列分析表明,GmolCSP开放阅读框序列为384 bp,编码127个氨基酸残基,预测N末端含有18个氨基酸组成的信引肽序列,其成熟蛋白的预测分子量为12.80 kD,等电点为8.33.该基因编码的氨基酸序列与其他鳞翅目昆虫化学感受蛋白的氨基酸序列具有较高同源性.RT-PCR结果显示,GmolCSP在梨小食心虫成虫触角、去触角的头、胸、腹、足和翅中都有表达.将GmolCSP重组到表达载体pET-32a中,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)进行表达.SDS-PAGE和Western印迹检测结果显示,梨小食心虫化学感受蛋白基因在大肠杆菌中成功地表达出一个分子量约为29 kD的融合蛋白,与预测的融合蛋白分子量大小一致.本研究结果为进一步研究该蛋白的分子结构和功能奠定了良好基础.