小鼠铁调素1功能肽Hepc25的表达及纯化

• 作者: 常彦忠 栗海峰 段相林 石振华 赵述强
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: Hepcidin1 Hepc25 铁代谢 融合蛋白 SDS-PAGE 层析 免疫印迹法 小鼠
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 细胞核分子生物学
• 页码范围: 372-376
• 分类号: Q7|R33
• 字数: 4204字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1356.2012.03.015

摘要

目的 利用原核生物表达载体表达小鼠铁调素功能肽Hepc25,并对其进行纯化. 方法 选取编码25aa的Hepc25基因与硫氧还蛋白基因融合后在大肠杆菌中大规模诱导表达该融合蛋白,以RT-PCR法扩增小鼠Hepcidin1功能肽基因Hepc25,将目的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中获得pET-32a-Hepc25,再以pET-32a-Hepc25转化大肠杆菌BL21表达融合蛋白,收集菌体蛋白,用Western blotting和SDS-PAGE法检测融合蛋白,优化融合蛋白高表达条件.依次利用亲和层析、离子交换层析和凝胶排阻层析法纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切、高效液相色谱法(HPLC)分离纯化获得了目的蛋白Hepc25. 结果 成功构建了小鼠pET-32a-Hepc25融合蛋白表达载体,融合蛋白表达量约占大肠杆菌BL21总蛋白量的28％,融合蛋白在33℃、120r/min、终浓度为0.2mmol/L的异丙基-13-D硫化半乳庶糖(IPTG)诱导8h的条件下表达量最高,融合蛋白纯度达95％.融合蛋白经过色谱分离、酶切和HPLC分析,目的蛋白的纯度也达95％以上. 结论 利用原核生物表达载体成功表达并纯化了小鼠铁调素功能肽Hepc25,并筛选出了高表达的优化条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段相林	河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学实验室	121	1113	18.0	26.0
2	常彦忠	河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学实验室	81	606	14.0	19.0
3	赵述强	河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学实验室	2	20	1.0	2.0
4	石振华	河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学实验室	22	104	6.0	9.0
5	栗海峰	河北师范大学生命科学学院铁代谢分子生物学实验室	4	9	2.0	3.0