人Notch受体胞内区基因N2ICD和N3ICD克隆及真核表达体系的构建

• 作者: 凌焱 刘刚 孙芳 张小男 李伟东 李玉霞 梁龙 毛艳 陈惠鹏 陈珊
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: Notch信号通路 N2ICD/pEGFP N3ICD/pEGFP 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 108-113
• 分类号: Q78
• 字数: 4197字
• 语种: 中文

摘要

Notch信号通路与多种肿瘤的发生发展密切相关.对该通路中各受体功能的深入研究能够为揭示其致癌作用奠定基础.本研究采用RT-PCR的方法从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的cDNA中克隆人Notch2和Notch3受体胞内区基因(N2ICD和N3ICD基因),并构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体N2ICD/pEGFP和N3ICD/pEGFP,将序列正确的重组质粒转染HeLa细胞,显微镜下可见明显的绿色荧光,并定位在细胞核内.Western blotting检测目的蛋白成功融合表达,并能够提高其下游靶基因Hes1的转录活性.