7个shRNA分子对绵羊BMPR-1B基因的干扰作用分析

• 作者: 刘晨曦 周川 林嘉鹏 汪立芹 白杰 金贤华 阿米娜 黄俊成
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: BMPR-1B基因 shRNA HEK293细胞 慢病毒
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 586-592
• 分类号: S826.3
• 字数: 6199字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.03.025

摘要

为获得有效干扰绵羊BMPR-1B基因的shRNA干扰分子,从绵羊卵巢组织中扩增了l515bpBMPR-1B基因全长编码区cDNA序列,添加HA标签序列后,插入Plex-mcs慢病毒质粒,构建Plex-BMPR-1B慢病毒表达载体,转染HEK293细胞,并与2个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,用获得的重组慢病毒感染HEK293细胞;同时,将7个干扰分子与Pll-LentiLox3.7载体重组,并与3个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,获得干扰分子的重组病毒颗粒.最后用干扰分子重组的病毒颗粒感染整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞,进行qRTPCR和Western blot检测.结果显示:重组BMPR-1B蛋白质在稳定整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞系中获得了表达;研究中设计的7个shRNA分子能抑制绵羊BMPR-1B基因表达水平68.30%～99.86%,其中PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰分子的干扰效果最好.