人补体C1INH基因的原核表达及其抗血清的制备

• 作者: 何洪彬 刘晓 宋玲玲 朱其军 杨宏军 武建明 王洪梅 王立群 许燕
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 人补体C1INH 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 8-12,30
• 分类号: S811.6
• 字数: 4045字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2012.02.003

摘要

采用PCR技术获得人补体C1INH基因全长,以其为模板扩增出抗原表位基因片段命名为C1,然后将C1片段重组到pET32a(+)载体中,筛选阳性克隆,转化大肠杆菌；IPTG诱导表达,用超声波裂解重组菌BL21培养物,纯化蛋白后免疫新西兰兔制备抗血清.SDS-PAGE分析表明,pET32a-C1融合蛋白在大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中以包涵体形式高效表达；获得的抗血清经间接ELISA法检测效价为1∶6 400；Western-blot检测显示,抗血清可与原核表达的C1INH蛋白进行特异性结合,为进一步检测真核表达蛋白及研究rhC1INH的功能活性,并为C1INH的临床检测奠定基础.