猪肺炎支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

• 作者: 冯志新 刘茂军 张旭 熊祺琰 车巧林 邵国青
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎支原体 黏附 间接免疫荧光
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1069-1073
• 分类号: S828.8+9
• 字数: 3780字
• 语种: 中文

摘要

为了建立一种用间接免疫荧光技术检测猪肺炎支原体黏附宿主细胞的方法.以抗猪肺炎支原体单克隆抗体为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗小鼠IgG为二抗,通过对一抗、二抗工作浓度的优化确定合适的抗体浓度;通过以1×107 CCU/ml猪肺炎支原体与PK15细胞作用不同时间,确定其黏附细胞需要的时间;通过不同滴度的猪肺炎支原体与PK15细胞37℃作用4h,确定其黏附细胞需要的滴度.猪肺炎支原体单克隆抗体P463G11的最适工作浓度为1∶1000倍稀释,FITC-羊抗小鼠IgG的最适工作浓度为1∶200倍稀释,猪肺炎支原体黏附PK15细胞需要的时间为4h以上,黏附PK15细胞需要的滴度为1×105 CCU/ml以上.表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪肺炎支原体对宿主细胞的黏附作用.