禽波纳病毒分离鉴定及其恒温扩增检测分析

• 作者: 刘志玲 吴晓薇 周小明 唐羿 常彦磊 朱道中 林志雄 王宏 田纯见 罗琼 罗长保 赵吟 陈茹 鱼海琼
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽波纳病毒 腺胃扩张症 环介导逆转录恒温扩增 快速检测 进化树分析
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1847-1854
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.3|S858.315.3
• 字数: 4613字
• 语种: 中文

摘要

利用腺胃扩张症(PDD)患病鹦鹉腺胃RT-PCR阳性病料,接种猪睾丸(ST)传代细胞,分离禽波纳病毒(ABV),建立实时RT-LAMP检测方法.将阳性病料接种ST细胞单层传代,出现细胞圆缩、脱落,ABV基质蛋白(M)基因扩增产物出现预计大小351 bp条带,测序后进化树分析显示为ABV5基因型.针对M基因设计ID37、ID30、ID19、ID6和ID1共5组引物,后3组引物RT-LAMP呈阳性反应.利用钙黄绿素建立实时RT-LAMP,分别在36(ID30)、38(ID37)和49(ID19)min出现扩增反应曲线,60 min内扩增达到峰值.对各种临床样品检测与RT-PCR结果一致,新城疫等类症病毒未见阳性反应,显示较高的特异性 ;对细胞培养物检测10-1～10-5为阳性,比较RT-PCR敏感性提高约100倍.RT-LAMP检测方法的建立为PDD防制提供新的检测方法,也是波纳病公共卫生研究有益的参考.