CYP2E1基因RNA干扰载体的构建与表达

• 作者: 何晓阳 刘庆成 徐新云 毛侃琅 毛吉炎 黄海燕
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 生物学
• 关键词: CYP2E1 RNA干扰 慢病毒 载体
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 290-294
• 分类号: Q78
• 字数: 4122字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2012.04.012

摘要

目的:构建CYP2E1基因shRNA慢病毒表达载体,为研究CYP2E1在药物代谢和环境污染物代谢中的作用提供技术支持.方法:通过NCBI检索CYP2E1序列,设计合成3对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体PLKO.1-puro,将重组质粒转化到感受态JM107中.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒和包膜蛋白质粒共转染到293FT细胞,收集病毒上清,转导肝细胞L02,利用嘌呤霉素筛选得到CYP2E1缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果.结果:PCR和测序结果证明双链shRNA已经正确插入慢病毒载体PLKO.1-puro,共转染293FT细胞得到高滴度病毒,转导L02细胞筛选出CYP2E1 基因沉默细胞,荧光定量PCR检测shRNA3的最高抑制效率为86.9％,Western blot鉴定shRNA3基本无CYP2E1表达.结论:利用慢病毒介导RNAi技术成功构建了CYP2E1基因沉默细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐新云		61	338	11.0	15.0
2	黄海燕		57	204	8.0	11.0
3	毛吉炎		4	16	2.0	4.0
5	何晓阳	深圳大学生命科学学院	5	61	3.0	5.0
6	毛侃琅		2	6	2.0	2.0
7	刘庆成		5	19	3.0	4.0