HER2胞外段的克隆与原核表达

• 作者: 冯紫雅 张小影 徐莲花 罗磊 许银辉 邬仙华 郭晓芳 钱晨旭
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人表皮生长因子受体2 胞外结构域 原核表达 pET-30a载体
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 88-93
• 分类号: Q55
• 字数: 5973字
• 语种: 中文

摘要

应用RT-PCR技术从人乳腺癌细胞系SK-BR-3中克隆出人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)基因的胞外段,并插入到表达载体pET-30a中,得到重组表达载体pET30-HER2( Ex).将该载体转化至大肠杆菌BL21( DE3)细胞中,加入IPTG进行诱导表达,成功获得HER2胞外段蛋白.分别提取培养液上清、大肠杆菌周质腔、细胞质可溶性及不可溶性组分蛋白进行SDS-PAGE电泳分析,确定目的蛋白定位于大肠杆菌细胞质包涵体中.通过改变诱导温度、诱导物浓度、诱导起始菌体密度和诱导时间,寻找最佳表达条件,使目的蛋白的表达量达到最高.结果表明,在37℃下,OD600达到1.0时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高.将重组表达菌进行超声破碎,分离出包涵体组分,经Ni2+亲和层析纯化后获得了纯度＞90％的HER2胞外段蛋白,从而为抗HER2抗体的制备及肿瘤疫苗的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许银辉	新乡医学院第二临床学院	3	3	1.0	1.0
2	罗磊	新乡医学院医学检验系	2	3	1.0	1.0
3	郭晓芳	新乡医学院微生物教研室	10	47	4.0	6.0
4	邬仙华	新乡医学院临床医学院	1	3	1.0	1.0
5	钱晨旭	新乡医学院第二临床学院	1	3	1.0	1.0
6	徐莲花	新乡医学院临床医学院	1	3	1.0	1.0
7	冯紫雅	新乡医学院三全学院	1	3	1.0	1.0
8	张小影	新乡医学院护理学院	1	3	1.0	1.0