端粒酶线粒体转位与肝癌细胞多药耐药的相关性研究

• 作者: 凌贤龙 周源 文蕾
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 抗药性,多药 端粒 线粒体 SK-Hep1细胞
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7-15
• 分类号: R735.7
• 字数: 8055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2012.01.002

摘要

目的:本研究旨在观察人端粒酶( human telomerase)线粒体转位对肿瘤多药耐药的影响.方法:分别采用顺铂( cisplatin,CDDP)大剂量冲击和间歇诱导的方法处理人肝癌SK-Hep1细胞株,建立具有不同程度耐药指数(resistance index,RI)的人肝癌耐药细胞株;采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测各组细胞的药物敏感性,计算半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)和RI; FCM法检测细胞周期及凋亡率;免疫荧光染色检测人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在细胞核和线粒体中的分布;蛋白质印迹法检测hTERT蛋白在全细胞和线粒体中的表达情况;实时定量基因扩增荧光检测系统(real-time quantitativePCR detecting system,Q-PCR)检测SK-Hep1亲本细胞株和各耐药细胞株的端粒相对长度;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的氧化损伤;JC-1染色法检测线粒体的膜电位.结果:获得3株对CDDP具有不同程度RI的SK-Hep1细胞,分别命名为SK-Hep1/CDDP1、SK-Hep1/CDDP2和SK-Hep1/CDDP3细胞,CCK-8检测结果显示,它们对CDDP的RI值分别为7.51、9.31和13.76,并对多柔比星和5-氟尿嘧啶有交叉耐药作用.FCM法、免疫荧光染色法、Q-PCR系统、RFQ-PCR法及JC-1染色法的检测结果显示,随着RI值的增加,各耐药细胞株的凋亡率明显降低,hTERT逐渐从细胞核转位到了线粒体中,细胞中的端粒明显缩短,损伤的mtDNA逐渐减少,线粒体膜电位降低.结论:多药耐药肿瘤细胞中端粒酶线粒体转位增加,线粒体端粒酶可发挥保护线粒体的作用.肿瘤细胞通过端粒酶的线粒体保护功能抵抗凋亡.因此,端粒酶线粒体转位可能是肿瘤细胞多药耐药的另一重要的作用机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	凌贤龙	第三军医大学新桥医院消化科	44	228	9.0	12.0
2	周源	第三军医大学新桥医院消化科	20	50	4.0	5.0
3	文蕾	第三军医大学新桥医院消化科	1	3	1.0	1.0