pEGFP-C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选

• 作者: 张松 李建琦 王军 许春红 邹晓平 陈敏 黄淑玲
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺肿瘤 热休克蛋白类 转染 SW1990细胞株 基因携带体
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 177-180
• 分类号: R576
• 字数: 2367字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2012.03.011

摘要

目的 构建表达热休克蛋白27( HSP27)的携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核载体,建立稳定表达HSP72的人胰腺癌SW1990细胞株.方法 采用RT-PCR法从SW1990细胞中扩增出带有BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位点的HSP27基因片段,插入真核表达载体pEGFP-C1,鉴定正确后用重组质粒转染SW1990细胞,并筛选稳转细胞株.荧光显微镜观察HSP72的定位,RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染细胞HSP27的表达.结果 双酶切法鉴定和测序证实重组载体pEGFP-C1 -HSP27的DNA序列完全正确,并成功转染SW1990细胞,筛选获得稳转细胞株.荧光显微镜见EGFP主要分布在胞质中,转染细胞的HSP27mRNA表达明显增加(1.458±0.160比0.897 ±0.051,P＜0.05),且表达HSP27与EGFP的融合蛋白.结论 成功构建真核表达载体pEGFP-C1-HSP27,并筛选获得稳转的细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹晓平	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	245	1329	17.0	23.0
2	王军	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	74	266	9.0	12.0
3	陈敏	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	40	174	8.0	12.0
4	李建琦	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	5	26	3.0	5.0
5	张松	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	16	38	4.0	6.0
6	许春红	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	4	15	2.0	3.0
7	黄淑玲	南京大学医学院附属鼓楼医院消化科	7	13	2.0	3.0