芥菜开花调控蛋白SVP与FLC酵母表达载体的构建及其相互作用研究

• 作者: 丁宁 宋明 李念祖 汤青林 王志敏 陈竹睿
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 芥菜 SVP FLC 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1175-1182
• 分类号: S637.1
• 语种: 中文

摘要

为深入研究芥菜开花信号整合子的两个核心调节因子SHORTVEGETATIVEPHASE（SVP）与FLOWERINGLOCUSC（FLC）相互作用的分子机理，通过PCR扩增，从芥菜材料‘QJ’中分别克隆含EcoRI／BamHI双酶切位点的SVP和FLC编码区全长，并利用酵母双杂交体系，将FLC与GAL4报告基因DNA激活域融合（pGADT7FLC），SVP与GAL4报告基因DNA结合域融合（pGBKT7SVP）。两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现白激活和毒性现象。融合的二倍体酵母（pGADT7FLC×pGBKT7SVP）能在选择性固体培养基QDODUA（SD／-Ade／-His／-Leu／-Trp／X-α-GaFAbA）上生长，并且菌落呈蓝色。将诱饵质粒（pGBKT7SVP）与猎物质粒（pGADT7FLC）载体互换（pGADT7SVP、pGBKTTFLC），再次转化酵母后仍能融合成二倍体酵母（pGADT7SVP×pGBKT7FLC），并同时激活报告基因AURI-C、HIS3、ADE2、MELl，由此表明SVP与FLC蛋白能够相互结合。