A型产气荚膜梭菌α毒素Thr-272基因定点突变与结构分析

• 作者: 樛跃 许崇波
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 产气荚膜梭菌 α毒素基因 定点突变 基因表达 圆二色光谱
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 186-192
• 页数: 7页
• 字数: 5345字
• 语种: 中文

摘要

利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素( CPA)第272位苏氨酸(ACA)定点突变成脯氨酸(CCG),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21( DE3)(pMCPA-T272P).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPAT272P含有CPA-Thr272Pro突变基因,且基因序列和阅读框架正确.重组菌株BL21( DE3)(pMCPA-T272P)表达产物经SDSPAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的18.34％.应用ExPASy服务器上的SOPMA法对CPA和CPA-Thr272Pro突变体分子进行二级结构预测,同时模拟了其3D结构.结果显示,CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的二级结构主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成,3D结构非常相似.CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现二者的CD光谱有一些微小变化.磷脂酶C活性检测结果表明,CPA-Thr272Pro突变体蛋白失去了α毒素的磷脂酶C活性.免疫试验结果表明,用CPA-Thr272Pro突变体蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的A型产气荚膜梭菌标准株C57-1毒素攻击.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许崇波	大连大学医学院	70	565	12.0	20.0
2	樛跃	大连大学医学院	1	2	1.0	1.0