特异腐质霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质

• 作者: 林国滟 柯崇榕 蔡少丽 郑海英 黄平 黄建忠
• 来源期刊: 微生物学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 中性内切葡聚糖酶Ⅱ 特异腐质霉 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 工业微生物
• 页码范围: 145-153
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

[目的]在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究.[方法]利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ的cDNA.将其插入表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后电击转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115.[结果]SDS-PAGE和酶活的检测结果均表明:egⅡ基因在毕赤酵母中成功表达.重组酶的部分酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为70℃,且在65℃以下具有较好的热稳定性.最适反应pH为6.5,在pH 6.0-7.0之间有较好的稳定性.[结论]用重组毕赤酵母可高效表达外源中性内切葡聚糖酶,为其今后在工业应用奠定了基础.