Aβ42及GM-CSF双基因重组腺病毒的构建和免疫原性

• 作者: 何芬 姚志彬 李建锋 杨俊华 牛道立 邹俊涛 靳晓宇 魏旋
• 来源期刊: 解剖学研究
• 学科: 医学
• 关键词: β-淀粉样蛋白 重组腺病毒 阿尔茨海默病 基因治疗
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 245-250
• 分类号: R543.5
• 字数: 4877字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-0770.2012.04.002

摘要

目的 构建含有β-淀粉样蛋白( Aβ42)及核糖体进入位点(IRES)引导的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)双表达重组腺病毒疫苗.方法 PCR法扩增带有IgGK轻链信号肽序列的Aβ42基因、IRES基因和小鼠GM-CSF基因,定向克隆于穿梭质粒pAdTrack-CMV中.通过与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌内同源重组形成重组腺病毒质粒Ad-Aβ42-IRES-GMCSF,转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(AD-Aβ42).重组腺病毒经氯化铯密度梯度离心纯化后感染293细胞及Hela细胞,用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测Aβ42及GM-CSF在细胞内和培养液中的分泌表达.免疫动物鉴定其免疫原性.结果 pAdTrack-Aβ42-GMCSF测序结果和预期一致,纯化的AD-Aβ42感染Hela细胞后,免疫细胞化学证实Aβ42基因在Hela细胞内表达.AD-Aβ42感染293细胞后,ELISA检测培养上清中Aβ42含量为(159.87±33.26)ng/mL,GM-CSF含量为(205.45±38.20)ng/mL.免疫动物能诱导机体产生高滴度的抗Aβ抗体.结论 成功制备了AD-Aβ42,核糖体进入位点(IRES)成功引导的GM-CSF的表达,感染细胞证实其呈分泌表达,接种动物能诱导高滴度抗Aβ抗体.为老年性痴呆(AD)的基因治疗做好铺垫.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛道立	广州医学院第一附属医院放疗科	28	245	6.0	15.0
2	何芬	广州医学院第一附属医院放疗科	17	83	5.0	8.0
3	邹俊涛	中山大学中山医学院人体解剖学教研室	28	51	4.0	6.0
4	杨俊华	中山大学中山医学院人体解剖学教研室	7	22	3.0	4.0
5	李建锋	广州医学院第一附属医院放疗科	6	22	2.0	4.0
6	魏旋	广州医学院第一附属医院放疗科	5	17	2.0	4.0
7	姚志彬		1	0	0.0	0.0