RNAi介导的Bip表达下调促进基于蛋白质剪接的双链共转基因细胞分泌FⅧ凝血活性

• 作者: 刘泽隆 屈慧鸽 朱甫祥 缪静 迟晓艳
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 凝血因子Ⅷ 免疫球蛋白重链结合蛋白 蛋白质剪接 双链转基因 免疫印迹法 酶联免疫吸附测定 发色分析法
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 细胞和分子生物学
• 页码范围: 624-628
• 页数: 5页
• 分类号: Q51|R96
• 字数: 4842字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1356.2012.05.008

摘要

目的 探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子VIII (FⅧ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅧ蛋白的量和活性的影响.方法 以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型FⅧ( BDD-FⅧ)的重链和轻链基因表达载体共转染经Bip-siRNA处理的细胞,免疫印迹法检测Bip的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长,用酶联免疫吸附( ELISA)和发色分析法分析转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性.结果 RNA干扰下调Bip表达作用明显,细胞生长不受影响；Bip下调的共转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ和重链量分别为(142±33) μg/L和(197±43) μg/L,明显高于对照细胞[分别为(89±23)μg/L和(120±27) μg/L]；Bip下调的共转基因细胞分泌的FⅧ凝血活性为(1 050±160)IU/L,明显高于对照细胞[640±170(IU/L)].结论 Bip表达下调通过促进剪接BDD-FⅧ的分泌可有效提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因功效,为进一步动物体内实验提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	屈慧鸽	鲁东大学生命科学学院	72	330	10.0	15.0
2	刘泽隆	鲁东大学生命科学学院	49	99	7.0	9.0
3	缪静	鲁东大学生命科学学院	57	250	10.0	14.0
4	朱甫祥	鲁东大学生命科学学院	38	21	3.0	4.0
5	迟晓艳	鲁东大学生命科学学院	47	54	4.0	6.0