稳定表达CD163蛋白的猪肺泡巨噬细胞系的建立

• 作者: 侯继波 冯磊 赵凯 郑其升 陈溥言
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CD163 猪肺泡巨噬细胞 重组细胞系
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 565-570
• 分类号: Q78
• 字数: 4435字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.03.021

摘要

以RT-PCR方法从原代猪肺泡巨噬细胞中获得CD163cDNA序列,然后测序鉴定,对突变碱基进行修正,将修正后碱基序列克隆入真核表达载体pcDNA4.0中,构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-CD163,通过BamHⅠ/NotⅠ双酶切及测序鉴定其正确性.使用脂质体2000将pcDNA4.0-CD163转染猪肺泡巨噬细胞系3D4/21(CRL-2843),通过Zeocin抗性筛选,建立稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系.RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)检测结果表明CD163在mRNA和蛋白质水平均已表达.通过Zeocin抗性筛选,共获得8株表达CD163的重组细胞株,IFA检测结果表明表达的CD163定位于重组细胞的细胞膜表面.去除筛选抗性后连续传代10代,间接免疫荧光检测结果确定重组细胞株在10代内性状稳定,说明稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈溥言	南京农业大学动物医学院	269	2875	28.0	40.0
2	赵凯	南京农业大学动物医学院	1	3	1.0	1.0
6	冯磊		1	3	1.0	1.0
7	郑其升		5	8	2.0	2.0
8	侯继波		7	27	2.0	5.0