正交设计优化山野豌豆SRAP-PCR反应体系与引物筛选

• 作者: 刘芳 刘颖 张巨明 王显国
• 来源期刊: 草业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 山野豌豆 SRAP PCR体系优化 正交设计 引物筛选
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 325-330
• 页数: 6页
• 分类号: Q943
• 字数: 3168字
• 语种: 中文

摘要

采用正交试验设计,以山野豌豆叶片DNA为模板,从Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对山野豌豆SRAP- PCR反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的SRAP- PCR最佳反应体系.结果表明,山野豌豆SRAP- PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer(不含Mg2+)、30 ng的模板DNA、引物2.0 μmol/L、Mg2+ 2.0 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、dNTP 0.2mmol/L,总体积为25 μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,dNTP浓度的影响最小.运用该体系对3份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从98对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的20对引物组合.这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为SRAP分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘芳		16	69	5.0	8.0
2	王显国	中国农业大学动物科技学院	71	442	11.0	17.0
3	刘颖	华南农业大学农学院	42	207	8.0	12.0
4	张巨明	华南农业大学农学院	54	323	9.0	14.0