HBc蛋白与NIRF蛋白细胞外相互作用鉴定

• 作者: 杨艳 段昌柱 王筱绘 白露 金方敏
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: HBc NIRF 相互作用 GST pull down
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-24,46
• 分类号: Q78|Q513
• 字数: 3460字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2012.01.021

摘要

构建原核表达质粒pGST-HBc,真核表达质粒pFLAG-NIRF,表达并纯化GST-HBc蛋白,表达FLAG-NIRF蛋白,利用GST pull down技术鉴定HBc与NIRF蛋白的相互作用.利用PCR技术分别扩增HBc编码框和NIRF基因全长,并将其分别插入到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体p3*FLAG-CMV-10中,构建出pGST-HBc及pFLAG-NIRF.pFLAG-NIRF转染HEK293,培养48 h,收获前10 h加入MG132抑制蛋白酶体,收获细胞,经NP40裂解后离心收集上清pGST-HBc转化BL21(DE3)细菌,优化培养条件使GST-HBc在上清中大量表达,然后用GST 4Bgel亲合纯化该蛋白,结合有GST-HBc蛋白与含FLAG-NIRF的细胞上清孵育后,离心收集GST 4Bgel,经洗脱液洗脱后蛋白电泳,western blotting分析.构建了pGST-HBc及pFLAG-NIRF,在上清中成功表达GST-HBc并纯化该蛋白,在细胞中成功表达FLAG-NIRF,GST pull down结果显示两者存在体外相互结合.HBc与NIRF能够在细胞外发生相互结合.